关于液氮罐冷冻细胞的那些事
实验室里，细胞的长期使用也需要长期冷冻保存，以便于长期保存，需要的时候取出来。使细胞复苏，就是让冬眠的细胞复苏起来。回复其生命活力

　　其实，细胞冻存技术和复苏技术已经不是什么高科技，不过这里面还有很多小的注意事项和流程方面需要的细节的。

　　一、冷冻越慢越好，复苏越快越好

　　高大上的实验室可以使用程序冷冻仪，一切由机器代劳，普通实验室就需要人工实现预冻的过程了，不过，细胞冷冻越慢越好，宁慢勿快。做细胞冷冻前，事先留出充足的时间。

　　而复苏速度越快越好：从液氮罐里取出来之后，迅速放在37°C水浴中，然后使劲摇呀摇，令其尽快融化。

　　二、高高兴兴上班，平平安安回家

　　细胞冻存和复苏是细胞培养技术里面最容易出事的部分，凡是和液氮罐接触的操作，注意戴?；ぱ劬岛褪痔?。最需要小心的是：复苏的时候，在水浴中摇呀摇的时候，有时候小瓶会爆炸的。所以，一定要戴?；ぱ劬岛褪痔住?br />
　　细胞冻存液中的DMSO是有毒致癌的，接触的时候一定一定要带好手套。

　　三、冻存细胞数量要足够

　　无论再怎么小心，细胞在冷冻和复苏过程中总会死掉一批的。所以，一开始冻存细胞的数量要足够。一般最低要达到5×106／毫升，一瓶不够两瓶凑。但是，这个不能一概而论。有些细胞，比如：杂交瘤细胞，只需要1－3x106／毫升。

　　四、做好标记

　　把培养瓶放入提手，末端应该扎有小牌，注明主人的名字，细胞名称和冻存日期?；挂诿扛龆炒婀苌闲瓷舷赴疲投炒嫒掌?。

　　实验室的液氮罐都是公用的，每个人应该有属于自己的提手。毛博当年就发生过为了找自己的细胞，被迫把整个液氮罐翻了个底朝天的惨剧。

　　五、细心呵护

　　刚刚复苏的细胞就象刚刚出生的baby，非常脆弱，需要我们的细心呵护。培养液要事先在培养箱或者水浴中复温，一切的和细胞接触的动作都要轻柔。

　　把细胞从冻存管里吸出来，注入离心管，要轻轻地吸取和滴加。包括给离心管补加培养液的时候，都要轻轻地滴加。离心要用低速离心（500－1000转／分钟），吹打要用专用的吹打管，而不要图方便用移液枪，吹打也要轻轻的。

　　六、DMSO的问题

　　上面提到了DMSO是一种有毒致癌物质。那么，解冻之后，应不应该去除冻存液中的DMSO呢？答案是no。除了极少数特别注明的对DMSO敏感的细胞外，99％的细胞都不需要去除DMSO，解冻后的频繁换液会慢慢去除掉DMSO的。

　　七、物离乡贵，人离乡贱

　　解冻后的细胞要用和以前一样的培养液和血清。因为每一种细胞都有自己特定的，并且已经熟悉了的生长环境。突然使用不一样的培养液和血清，会造成细胞生长不良，甚至死亡。这和一个人突然离家千里，会水土不服是一样的道理。

　　细胞培养离不开人。毛博还记得当年当实验狗的时候，放个长假都要惦记着培养箱里面的细胞是不是该换液了。而掌握了有效的冻存和复苏的技术，就可以解决这个问题。春节回家前把细胞都冻上，过了年回来再开干。